京都大學Shin Kaneko教授團隊利用CRISPR/Cas9基因編輯開發(fā)了一種低免疫原性的同種異體誘導多能干細胞（iPSC）來源T細胞療法，該研究成果于近日發(fā)表在Nature Biomedical Engineering上。

一個用于腫瘤免疫治療的理想T細胞產品，除了需必備抗原特異性效應功能外，還應具有以下特征：

1. 沒有針對宿主正常細胞不必要的效應功能，以避免移植物抗宿主反應（GVHD）；

2. 具有宿主可接受的抗原性水平，以阻止免疫排斥；

3. 含有大量的初始T細胞和TSCM細胞，以確保足夠的T細胞擴增和持久性。

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然而，很難從同種異體供體T細胞中生成此類T細胞。刪除同種異體因子和激活細胞毒性免疫細胞的因子，是保護T細胞移植物免受免疫排斥的一種可行的解決方案，但是對T細胞（尤其是使用原代T細胞）多次進行基因組編輯通常需要多步重復操作（包括多次循環(huán)進行T細胞擴增），這可能會導致最終T細胞產物的衰竭和功能喪失。

iPSC細胞具有無限擴增潛力，可以分化為任何細胞類型，包括用于過繼細胞免疫療法的T細胞。重要的是，它們的擴增和分化潛力都不受多次基因編輯的影響。因此，將iPSC應用于同種異體T細胞療法的開發(fā)具有巨大潛力。

不過應該對哪些基因加以編輯來避免移植T細胞的免疫排斥呢？Shin Kaneko教授表示：“為了使移植物存活，需要抑制3類免疫細胞。其中，CD8 T細胞引起最強烈和最危險的反應，此外，CD4 T細胞和NK細胞也必須加以考慮。” 

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已有研究表明，表達HLA-I的野生型iPS-T會引起同種異體CD8 T細胞的免疫反應，因此，該研究中利用CRISPR/Cas9敲除了構建HLA-I分子的關鍵基因B2M（下圖1）。對于CD4 T細胞由HLA-II介導不必要的激活反應，則選擇敲除了CIITA基因（下圖2）。為減少NK細胞的“自我攻擊”（missing-self attack），選擇了轉導NK細胞抑制性配體HLA-E，并敲除NK細胞激活性配體PVR（下圖3和4）。

此外，Shin Kaneko教授團隊還將嵌合抗原受體 (CAR) 技術整合到經過一系列基因編輯的iPS-T細胞中，并在白血病或淋巴瘤小鼠模型中進行了測試。

研究表明基因編輯不會損害CAR的有效性，相比于沒有經過基因編輯的細胞，改造過的低免疫原性CAR iPS-T細胞顯示出更強的抗癌效果。

總體而言，避免移植T細胞的免疫排斥是同種異體腫瘤免疫療法成功的關鍵。這項研究證明了通過敲除iPSC中HLA-I（B2M）、HLA-II基因（CIITA）和NK細胞激活性配體（PVR），并敲入NK細胞抑制性配體（HLA-E）所獲得的同種異體多能干細胞，是作為同種異體T細胞療法來源的一種潛在策略。